对有硝化作用的污水处理系统的出水进行BOD5测定时，由于其中含有很多硝化细菌，测定结果中就包含了氨氮等含氮物质的需氧量。
测定BOD5时水样稀释法分一般稀释法和直接稀释法两种，其中一般稀释法需要使用的稀释水或接种稀释水数量较多。
稀释倍数过大或过小，可导致5d耗氧量太少或太多，超出正常耗氧范围使实验失败。而由于BOD5的测定周期很长，一旦出现此类情况，就无法以原样补测。因此，必须十分重视稀释倍数的确定。
稀释水的质量对BOD5的测定结果的准确性意义重大，因此要求稀释水空白5日耗氧必须小于0.2mg/L，最好能控制在0.1mg/L以下，接种稀释水5日耗氧应在0.3~1.0mg/L之间
BOD5的测定是一个生物化学耗氧过程，水样中的微生物以水中有机物为营养生长繁殖的同时，分解有机物并消耗了水中的溶解氧
BOD5测定通常采用标准稀释与接种法(GB 7488--87)，其操作为，经中和及除去毒性物质并经稀释后的水样(必要时加入适量含好氧微生物的接种液)置入培养瓶中
